Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере

Содержание
  1. Подсчет количества лейкоцитов: обзор методик от врача
  2. Методики подсчета количества лейкоцитов
  3. Подсчет лейкоцитов в счетной камере
  4. Растворы и реагенты для подсчета лейкоцитов
  5. Подсчёт лейкоцитов на анализаторе
  6. Подсчеты остаточных лейкоцитов
  7. Подсчет лейкоцитов в мазке
  8. Подсчёт лейкоцитов в моче
  9. Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере
  10. Обслуживание камеры
  11. Методика подсчёта лейкоцитов
  12. Норма лейкоцитов и отклонения
  13. Лейкоцитарная формула
  14. Методика подсчёта лейкоцитов в моче
  15. Сбор мочи
  16. Методика расчета
  17. Лейкоциты
  18. Количественное определение лейкоцитов
  19. Подсчет лейкоцитов с помощью камеры Горяева
  20. Количественное содержание лейкоцитов
  21. Взятие крови в смесители для подсчета эритроцитов и лейкоцитов
  22. Взятие крови в пробирки для подсчета эритроцитов и лейкоцитов по Н. М. Николаеву
  23. Изучение счетной камеры Горяева и заполнение ее кровью для подсчета эритроцитов и лейкоцитов
  24. Подсчёт эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере Горяева
  25. Подсчет эритроцитов в камере Горяева — каким образом происходит вычисление уровня эритроцитов?
  26. Строение камеры Горяева
  27. Разбавление крови с целью исследования
  28. Разбавление крови в меланжере
  29. Разбавление крови в пробирке
  30. Подсчет количества эритроцитов
  31. Возможные причины искажения результата
  32. Подсчет лейкоцитов и эритроцитов в камере Горяева (методика)
  33. Описание сетки камеры Горяева
  34. Правило Егорова для подсчета форменных элементов
  35. Методика подсчета лейкоцитов
  36. Методика подсчета эритроцитов

Подсчет количества лейкоцитов: обзор методик от врача

Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере

Для выявления функции иммунной системы, наличия инфекционного процесса терапевты назначают анализ для подсчета количества лейкоцитов. Существуют разные методики исследования. Возможно определение числа клеток под микроскопом или с помощью полуавтоматического анализатора. У каждого метода существуют положительные стороны и недостатки.

Общий подсчет лейкоцитов проводится при исследовании крови. Определяют количество не только белых кровяных телец, но и других форменных элементов. С помощью метода подсчета лейкоцитов можно выявить не только отклонение иммунной системы, но и другие заболевания и состояния. В общем анализе крови определяется количество эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов, лейкоцитарная формула, СОЭ.

Благодаря ОАК выявляются следующие патологические состояния:

  • воспалительный процесс;
  • нарушение иммунной системы;
  • вирусные, бактериальные, паразитарные инфекции;
  • анемия или эритроцитоз;
  • повышенная или пониженная свертываемость крови.

Дифференцированный подсчет количества лейкоцитов позволяет выявить процентное соотношение их популяции. Проводят исследование на полуавтоматическом анализаторе. Если у врача остаются сомнения, назначают ручное исследование мазка крови. С его помощью можно определить состояние клеток, их внешний вид.

В лейкоцитарной формуле определяются следующие показатели:

  • нейтрофилы;
  • базофилы
  • эозинофилы;
  • моноциты;
  • лимфоциты.

С помощью общего анализа крови можно не только следить за состоянием иммунной системы, но и выявить другие факторы, вызывающие нарушения в организме. Определяют следующие нарушения:

  • наличие бактерий или вирусных агентов;
  • аллергические реакции на чужеродный агент;
  • присутствие паразитической инфекции;
  • появление злокачественной и доброкачественной опухоли.

Определяется не только количественный состав лейкоцитарной формулы, но и наличие молодых или более взрослых клеток. Поэтому говорят о сдвиге формулы влево (к молодым клеткам) или вправо (к зрелым клеткам).

Увеличение количества молодых нейтрофилов может быть в следующих случаях:

  • воспаление;
  • некроз (омертвление) тканей;
  • инфекция;
  • отравление;
  • приём лекарственных средств;
  • временное физиологическое повышение клеток.

Сдвиг лейкоцитарной формулы вправо бывает в следующих случаях:

  • лучевая болезнь;
  • гиповитаминоз;
  • почечная недостаточность;
  • печеночная недостаточность;
  • временное изменение состава крови после переливания.

Методики подсчета количества лейкоцитов

Существуют разные методики дифференцированного подсчета формулы лейкоцитов. Врач подбирает их в зависимости от оснащённости клиники, предполагаемого диагноза, состояния пациента.

  • Дифференцированный подсчет абсолютного количества лейкоцитов по номограмме. Выявляются все разновидности клеток, их процентное соотношение. Определяют повышенное или пониженное значение какого-либо показателя. Отрицательная сторона – не выявляется форма, размер, повреждение клеток. Методика выполняется на полуавтоматическом анализаторе.
  • Дифференцированный подсчет отдельных форм лейкоцитов. Анализ необходим при выявлении нарушения в общей формуле лейкоцитов. Врач назначает лечение, с помощью исследования следит за его тенденцией. Выполняется на полуавтоматическом анализаторе.
  • Визуальный подсчёт количества лейкоцитов с помощью микроскопа и счётной камеры. Врач визуально подсчитывается количество клеток в заданном объеме жидкости, оценивает их форму, размер, целостность.

Подсчет лейкоцитов в счетной камере

Для подсчета количества лейкоцитарных клеток используется специальная камера, сверху которой накладывается предметное стекло. На углублениях счетного приспособления имеется микроскопическая сетка с большими и малыми квадратами, по которым подсчитывают форменные элементы. Приспособление должно быть стерильным, подготовленным к работе.

Исследование проводится в несколько этапов.

  • Полученную кровь для подсчета лейкоцитов разводят в 20 раз с помощью уксусной кислоты.
  • Образовавшуюся жидкость набирают с помощью стеклянной палочки, добавляют внутрь камеры.
  • Наводят микроскоп, подсчитывает все лейкоциты при его перемещении слева направо, вниз, справа налево. Лейкоциты в крови подсчитывают в 100 квадратах, в моче – по всей сетке.
  • Полученные данные подставляют в лейкоцитарную формулу подсчета, вычисляя общее количество лейкоцитов. Это необходимо, так как кровь была разведена.

При просмотре мазка врач не только подсчитывает количество клеток, но и обращает внимание на их внешний вид. При выявлении поврежденных или измененных клеток, это записывается на бланк исследования.

Важно! Подсчёт количества лейкоцитов с помощью камеры может быть использован для крови и мочи.

Подробно о подсчете лейкоцитов в счетной камере.

Растворы и реагенты для подсчета лейкоцитов

Для использования счётной камеры необходимы подготовленные реагенты. Врач должен знать, как приготовить кровь для подсчета лейкоцитов.

  • Раствор уксусной кислоты для подсчета лейкоцитов, 3-5 %. Необходим для разведения крови, уничтожения эритроцитов. Красные кровяные тельца могут мешать просмотру лейкоцитов.
  • Метиленовый синий. Белые кровяные тельца прозрачны, невидимы без использования специфических реагентов. Метиленовый краситель подкрашивает клетки так, что видна их мембрана и внутренняя структура. Лаборант может рассмотреть гранулы внутри клетки, повреждения, нарушения, атипичность.
  • Этиловый спирт необходим для обеззараживания поверхности счётной камеры и предметных стёкол. Перед использованием приспособление протирают, после завершения исследования его полностью погружают в этиловый спирт.
  • Дистиллированная вода. Необходима для удаления следов этилового спирта.

Подсчёт лейкоцитов на анализаторе

Для точного расчета всех форменных элементов используют подсчет количества лейкоцитов на гематологическом анализаторе. Он вычисляет клетки в 1 мл биологической жидкости. Выделяют два вида анализаторов:

  • кондуктометрический (прибор просвечивает форменные элементы, вычисляя их разные параметры, что позволяет рассчитать эритроциты, тромбоциты, лейкоциты);
  • светооптический (вычисляет не только количество клеток, но и их качество).

Для исследования собирают свежую кровь или мочу, выделяют 1 мл. Для подсчёта лейкоцитов необходимо разведение специальными реагентами, которые устраняют наличие эритроцитов. Врач-лаборант закладывает биологическую жидкость внутрь аппарата, который сам подсчитывает форменные элементы. Прибор выдает результат анализа, который отправляют врачу.

Достоинства техники подсчета лейкоцитов:

  • снижение риска врачебной ошибки;
  • определение большого количества анализов за один рабочий день;
  • точность подсчёта клеток.

Отрицательные стороны метода:

  • высокая стоимость аппарата, который могут позволить не все клиники;
  • отсутствие визуального осмотра состояния клеток.

При подсчете на анализаторе лейкоциты имеют обозначение LEU, выражаются в мкл (микролитрах).

Подсчеты остаточных лейкоцитов

Для оптического просмотра и подсчета количества остаточных лейкоцитов возможно использовать аппарат ADAM. Для этого используют флюоресцентное вещество, которое помечает только лейкоциты. В отношении тромбоцитов и эритроцитов оно не применимо.

Метод выполняется в несколько этапов:

  • взятие капиллярной крови;
  • обработка биологической жидкости с помощью пропидия йодида, который связывается только с ДНК лейкоцитов (тромбоциты и эритроциты не имеют ядер);
  • помещение чипа в аппарат;
  • прибор фокусируется на флуорисцентном свечении, производится запись и подсчет клеток, выводится их изображение.

Метод высокоинформативен, так как дает точные результаты. Врач может просматривать изображение клетки в реальном времени.

Подсчет лейкоцитов в мазке

Для методики подсчета лейкоцитов в мазке необходима свежая капиллярная кровь. Её намазывают на предметное стекло сразу после забора биоматериала. Далее производят окрашивание по Романовскому-Гимзе. С помощью метода все клетки фиксируются и прокрашиваются, дальнейшие реакции не происходят.

Подсчет количества лейкоцитов на покровных стеклах осуществляется с помощью микроскопа. Наносят иммерсионное масло, чтобы все клетки лучше просматривались. Микроскоп переводят на иммерсионный объектив.

Клетки в образце располагаются неравномерно:

  • по периферии – моноциты и гранулоциты;
  • по центру – лимфоциты.

Микроскоп перемещают слева направо, вниз, справа налево. Мазок подсчитывают до тех пор, пока общее количество клеток не достигнет 100 единиц. Данные по каждому виду лейкоцитов заносят на бланк исследования.

Подсчёт лейкоцитов в моче

Осуществляют исследование форменных элементов и других образований в моче с помощью метода подсчета лейкоцитов по Нечипоренко. Для этого биологическую жидкость помещают в пробирку, центрифугируют. С помощью этого метода все образования выпадают в осадок. Его отбирают, переносят в счетную камеру.

Далее производят подсчет эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров в больших и малых квадратах. В норме у здорового человека должно быть не более 2 лейкоцитов на один образец биологической жидкости.

Лейкоцитарная формула – важнейшее исследование, которое позволяет выявить реактивность организма в ответ на попадание инфекционного агента.

Болезнь может протекать в скрытой форме, ее можно заподозрить в процессе подсчета белых кровяных телец. Исследование крови позволяет выявить состояние иммунитета, появление воспалительных процессов во внутренних органах.

Определение лейкоцитов в моче выявляет нарушения в мочевыделительной системе.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Источник: https://mirmam.pro/podschet-kolichestva-leykotsitov

Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере

Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере

Данный пробирочный метод состоит из следующих этапов:

  1. Пробирка заполняется уксусной кислотой с тиазиновым красителем на 0,4 мл. С помощью капиллярной пипетки берется 20 мкл свежей крови и выдувается в эту же пробирку. Полученная смесь тщательно смешивается.
  2. Тонкая стеклянная пластинка, находящаяся в камере, тщательно вытирается, после чего образуются радужные разводы.
  3. Далее берется капля полученного раствора из крови с уксусной кислотой и подносится к краю пластинки.
  4. Когда камера будет заполнена, ее не беспокоят в течение одной минуты, чтобы белые клетки крови начали оседать.
  5. При малом увеличении производится подсчет лейкоцитов.

Чтобы получить верные результаты, используют специальную формулу для подсчета количества лейкоцитов в 1 мкл крови. Нормой считается показатель от 4 до 9 на 10 л.

Если получился результат, превышающий данную отметку, то пациенту ставится диагноз — лейкоцитоз. Если наблюдается снижение – лейкопения. Но это в теории, на деле нужно смотреть и на другие показатели, чтобы точно определить заболевание.

Для подсчета лейкоцитов используют три вида формул:

N = m x 4000 x 20/(64 x 16) = m x 78.13 ≈ m x 78

N = m x 4000 x 20 / (169 x 16) ≈ m x 29.6

N = m x 4000 x 20 / (100 x 16) ≈ m x 50.

Камера Горяева – это прибор, который может наиболее точно подсчитать число лейкоцитов, а также других подобных частиц. В ее состав входит специальное толстое стекло с прямоугольной камерой. На ней расположена микроскопическая сетка и тоненькое оптическое стекло.

Этот аппарат разрабатывал известный профессор Горяев Николай Константинович, который трудился в Казанском университете. Его специфическая сетка давала наиболее точные результаты, чем камеры других известных ученых.

Что касается обслуживания камеры, то здесь тоже существуют свои нюансы. В перерывах от работы камера Горяева должна находиться в сухой зоне. Когда работа завершена, ее нужно обработать.

Для этого аппарат погружают в этиловый спирт (70%) на полчаса. Другой вариант очистки – это раствор формалина (4%) на один час.

Завершающим этапом становится промывка камеры Горяева дистиллированной водой и протирка мягкой тканью.

Существуют случаи, когда при низких показателях в организме пациента все в порядке. Это говорит о том, что основной резерв лейкоцитов находится в тканях. У таких людей предрасположенность к различным заболеваниям очень низка, поэтому они редко болеют. В основном это наследственность.

Обслуживание камеры

После использования инструмента предметное стекло дезинфицируют путём погружения в 4% раствор формалина на час или в 70% раствор этилового спирта на полчаса.

После этого камеру тщательно промывают дистиллированной водой. Излишек жидкости убирают мягкой салфеткой.

Стоит обратить внимание на то, что камеру нельзя протирать ватным тампоном из-за цепляющихся к ней волокон. Хранится стекло в сухом месте.

Правило Егорова

Во время использования камеры в подсчитываются те ФЭ, которые располагаются внутри квадрата сетки и на верхней и левой линии его периметра. При этом частицы, касающиеся правой и нижней линии периметра во время расчёта данной клетки не включаются.

Методика подсчёта лейкоцитов

Подсчёт количества лейкоцитов начинается с разведения крови в 3-5% растворе этановой кислоты с метиловой синью в 20 раз. Рабочий материал перед применением протирают марлей насухо.

Покровное стекло нужно протереть до возникновения цветных колец Ньютона. Далее, камеру заполняют разведённой кровью, при этом первые две капли выпускают на фильтровальную бумагу.

Жидкость попадает в камеру благодаря капиллярному свойству воды. Важно проследить, чтобы в желобки при заполнении ничего не затекало. Если это произошло, жидкость аккуратно убирают фильтровальной бумагой.

Затем оставляют сетку в покое на минуту, ожидая, пока ФЭ остановят своё движение.

Подсчёт лейкоцитов осуществляется в пределах ста больших квадратов при малом увеличении, то есть при окуляре 10х и объективе 8х, по правилу Егорова. Полученная цифра используется в формуле.

Х = (n× 250 × 20) / 100 или Х = n × 50

Х – количество лейкоцитов.

n – число, полученное в результате подсчёта в камере.

Количество лейкоцитов определяют, принимая во внимание число больших квадратов сетки – 100 и разведение крови – 20.

Как происходит подсчет лейкоцитов

Норма лейкоцитов и отклонения

Норма лейкоцитов у людей составляет 4,0 – 9,0 × 10⁹/л. Или, по-другому, в 1 кубическом мм крови располагается примерно 6000 белых кровяных клеток.

На отклонения от нормы могут влиять внешние физиологические факторы:

  • приём пищи перед сдачей крови;
  • стресс;
  • беременность или менструация у женщин;
  • переохлаждение или перегрев;
  • большая физическая нагрузка перед сдачей анализов.

Если количество белых кровяных клеток превышает 9,0 × 10⁹/л (повышены лейкоциты), такое состояние называется лейкоцитозом. Подобную картину можно увидеть при злокачественных заболеваниях крови, инфекциях, поражениях радиацией и отравлениях.

Лекарственные препараты тоже способны увеличить количество лейкоцитов. Некроз тканей, обильные кровотечения, в том числе в результате операций, почечная кома, болезни сердца – всё это может привести лейкоцитозу.

Падение количества лейкоцитов ниже 3,9 × 10⁹/л называется лейкопенией. Однако у некоторых людей фиксируется постоянное число лейкоцитов в количестве 3,5 × 10⁹/л.

Принято считать, что у таких людей сохраняется резерв этих клеток в тканях в 50 раз больше, нежели в крови.

Еще встречается функциональная лейкопения после введения анальгетиков, сульфаниламидов и других лекарственных препаратов, после долгой мышечной работы, в результате поражения инфекциями и вирусами (тиф, грипп, корь).

Лейкоцитарная формула

Все виды лейкоцитов составляют лейкоцитарную формулу. По ней можно выявить определённые патологии. Нормы формулы меняются в зависимости от возраста и периода жизни человека. Сдвиг хорошо заметен у женщин во время беременности или после родов.

Применяются разные способы подсчёта соотношения видов этих клеток, но все они связаны с тем, что более тяжелые клетки (базофилы, например) располагаются ближе к краю мазка, а лимфоциты, как легкие клетки, остаются в середине.

  • Метод Филипченко. В данном способе подсчёт осуществляется по поперечной прямой границы одного конца к другому. Мазок при этом мысленно разделяют на три части.
  • Метод Шиллинга. Лейкоциты подсчитывают в четырех участках мазка.

Полученные данные записываются в таблицу. Индивидуально количество каждого вида белых клеток крови высчитывается по формулам. Отмечаются те элементы, которые попали в поле зрения. Счёт ведётся до того, момента, пока сумма всех подсчитанных клеток не составит 100.

Методика подсчёта лейкоцитов в моче

В моче подсчитывается количество лейкоцитов в камере Горяева по Нечипоренко. Этот анализ нужен для мониторинга заболеваний почек. Периодическое исследование мочи помогает проследить за правильностью лечения и эффективностью назначенной терапии.

Сбор мочи

В изучение идёт только первая утренняя моча в середине мочеиспускания. Для пациента важно следовать основным правилам сбора этого биоматериала. Специальной дополнительной подготовки для исследования не требуется.

Методика расчета

10 мл свежесобранной мочи центрифугируют в течение трёх минут при 2,5 тыс. оборотов в минуту. Перед этим необходимо проследить, чтобы моча, во избежание частичного распада клеток, имела слабокислую реакцию.

При помощи пипетки с узким оттянутым концом убирают верхний слой. В пробирке оставляют от 0,5 мл мочи до 1 мл в зависимости от объёма осадка.

Осадок аккуратно перемешивают с надосадочной жидкостью. Полученным раствором заполняют счётную камеру Горяева по схожему принципу, что используется при подсчёте ФЭ крови. Камеру оставляют в покое от 3 до 5 минут.

Лейкоциты необходимо подсчитать в больших квадратах по всей сетке с окуляром 7х и объективом 40х.

Полученная цифра используется в формуле:

Х = (а/0,9) × (1000/V)

Х – число лейкоцитов в 1 мл мочи.

а – подсчитанное количество, делённое на объём камеры в 1 мкл осадка мочи.

v – Количество мочи, взятой для исследования.

1000 – количество осадка.

Это важно! Норма лейкоцитов: в 1 мл мочи не более 2 × 10³ белых кровяных клеток.

Лейкоциты

Количество лейкоцитов в крови зависит как от скорости их образования, так и от мобилизации их из костного мозга, а также от их утилизации и миграции в ткани (в очаги повреждения), захвата легкими и селезенкой.

На эти процессы, в свою очередь, влияет ряд физиологических факторов, и поэтому число лейкоцитов в крови здорового человека подвержено колебаниям: оно повышается к концу дня, при физической нагрузке, эмоциональном напряжении, приеме белковой пищи, резкой смене температуры окружающей среды.

Количественное определение лейкоцитов

Лейкоциты подсчитываются с использованием камеры Горяева и с помощью автоматических счетчиков.

Подсчет лейкоцитов с помощью камеры Горяева

При пробирочном методе взятия крови для подсчета лейкоцитов:

  • в пробирку наливают 0,4 мл раствора 3–5% уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Капиллярной пипеткой набирают из свежей капли 20 мкл крови (разведение в 20 раз), осторожно выдувают ее в пробирку с реактивом и ополаскивают пипетку. Смесь хорошо перемешивают;
  • чистое и сухое покровное стекло притирают к камере так, чтобы в месте соприкосновения образовались радужные кольца;
  • кровь, разведенную в пробирке, хорошо перемешивают. Концом круглой стеклянной палочки отбирают каплю крови и подносят к краю шлифованного стекла камеры;
  • после заполнения камеры ее оставляют на 1 мин в покое для оседания лейкоцитов;
  • считают лейкоциты при малом увеличении (объектив ×8 или ×9, окуляр ×10 или ×15) при затемненном поле зрения (при опущенном конденсоре или суженной диафрагме);
  • для получения удовлетворительных результатов подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах.

Зная объем большого квадрата и степень разведения крови, находят количество лейкоцитов в 1 мкл и 1 л крови. Сторона большого квадрата равна 1/5 мм, площадь — 1/25 мм2, объем пространства над этим квадратом — 1/250 мм3.

Формула для подсчета лейкоцитов:

где В — количество лейкоцитов в 100 больших квадратах;
П — степень разведения (20).

Количественное содержание лейкоцитов

Норма: 4,0–9,0 × 109/Л

Увеличение количества лейкоцитов выше 9,0 × 109/л называется
лейкоцитозом, уменьшение их числа ниже 4,0 × 109/л — лейкопенией. Однако даже 3,5 × 109 в 1 л лейкоцитов для ряда лиц может являться нормой.

По данным литературы, у таких людей повышена иммунная сопротивляемость и они реже болеют, что, по-видимому, объясняется необходимостью для осуществления иммунных реакций наличия резерва лейкоцитов в тканях, где их в 50–60 раз больше, чем в кровяном русле.

Очевидно, именно у здоровых лиц с низким содержанием лейкоцитов в периферической крови соответственно увеличены резервы их в тканях. Объясняют этот феномен наследственно-семейным характером или повышением влияния парасимпатической нервной системы.

Лейкопения может быть функциональной и органической.
Функциональная лейкопения связана с нарушением регуляции кроветворения и наблюдается:

  • при некоторых бактериальных и вирусных инфекциях (брюшной тиф, грипп, оспа, краснуха, болезнь Боткина, корь);
  • при действии лекарственных препаратов (сульфаниламидов, анальгетиков, противосудорожных, антитиреоидных, цитостатических и других препаратов);
  • при мышечной работе, введении чужеродного белка, нервных и температурных влияниях, голодании, гипотонических состояниях;
  • ложная лейкоцитопения может быть связана с агрегацией лейкоцитов во время длительного хранения крови при комнатной температуре (более 4 ч).

Органическая лейкопения, возникающая в результате аплазии костного мозга и замещения его жировой тканью, бывает при:

  • апластической анемии;
  • агранулоцитозе;
  • лейкопенической форме лейкоза;
  • некоторых формах лимфогранулематоза;
  • ионизирующем облучении;
  • гиперспленизме (первичном и вторичном);
  • коллагенозах.

Источник: https://yazdorov.win/krov/vzyatie-krovi-i-podschet-eritrotsitov-i-lejkotsitov-v-schetnoj-kamere.html

Взятие крови в смесители для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Для подсчета количества эритроцитов и лейкоцитов необходимы следующие реактивы:

  1. 3% раствор хлористого натрия (NaCl) : 3 г хлористого натрия помещают в колбочку на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.
  2. Реактив Гайема: к 0,5 г сулемы, 1 г хлористого и 5 г сернокислого натрия приливают 200 мл дистиллированной воды. Оба реактива сохраняют эритроциты.
  3. 3% раствор уксусной кислоты – 3 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Реактив подкрашивают 1% водным раствором генцианвиолета из расчета 5-6 капель краски на 10 мл 3% уксусной кислоты.

Кровь для подсчета эритроцитов и лейкоцитов берут в специальные смесители или в пробирки.

На чистый и сухой смеситель для эритроцитов надевают резиновую трубочку со стеклянным мундштуком, после чего в него насасывают кровь, без пузырьков воздуха, точно до метки 0,5, затем этим же смесителем набирают 3% раствор хлористого натрия или реактив Гайема точно до метки 101, не допуская появления пузырьков воздуха.

При этом кровь разводится в 200 раз. Со смесителя снимают резиновую трубочку, захватывают его между пальцами, несколько раз встряхивают, прокалывают им бумажку, на которой указана фамилия больного, и кладут его на стол в горизонтальном положении.

В чистый сухой смеситель для лейкоцитов таким же способом, как и в смеситель для эритроцитов, насасывают кровь до метки 0,5, после чего тем же смесителем набирают 3% раствор уксусной кислоты до метки 11.

При этом кровь разводится в 20 раз.

Затем со смесителя снимают резиновую трубочку, несколько раз встряхивают его, прокалывают им бумажку, на которой указана фамилия больного, и кладут на стол в горизонтальном положении.

Взятие крови в пробирки для подсчета эритроцитов и лейкоцитов по Н. М. Николаеву

Для каждого взятия крови берут две нумерованные пробирки, серологическую и агглютинационную. В серологическую пробирку помещают 4 мл 3% раствора хлористого натрия или реактива Гайема, а в агглютинационную – 0,4 мл 3 % раствора уксусной кислоты. В каждую пробирку вносят по 0,02 мл крови, взятой капилляром от гемометра, и тотчас же смешивают содержимое пробирок, вращая их между ладонями.

В серологической пробирке (для эритроцитов) получают разведение крови в 200 раз, а в агглютинационной (для лейкоцитов) – в 20 раз.

Изучение счетной камеры Горяева и заполнение ее кровью для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в специальных счетных камерах. Для этой цели пользуются счетной камерой Горяева, которая представляет собой стекло с нанесенными на него двумя сетками.

Сетки отделены одна от другой углублениями и делятся разграничительными линиями на 225 квадратов. Площадь сетки 9 мм2, высота, создающаяся при притирании шлифованного покровного стекла в камере, 0,1 мм, объем 0,9 мм3.

Перед заполнением камеры кровью ее моют водой и насухо вытирают.

К сухой поверхности камеры притирают шлифованное покровное стекло, плавно продвигая его по ней взад и вперед до появления цветных колец Ньютона в местах соприкосновения покровного стекла со стеклом камеры.

Затем кровь в смесителе встряхивают в течение 1-2 минут, после чего из смесителя выпускают на ватку 1-2 капли крови, следующую каплю помещают перед шлифованным покровным стеклом.

При нанесении капли крови надо следить за тем, чтобы в пространство над сеткой камеры не попал воздух и чтобы не было избытка жидкости. Одну сетку заполняют для подсчета эритроцитов, вторую – для подсчета лейкоцитов.

Для заполнения камеры Горяева кровью, взятой по способу Н. М. Николаева (пробирочный метод), поступают следующим образом. К счетной камере притирают шлифованное стекло.

Из каждой пробирки, предварительно встряхнув ее, с помощью стеклянной палочки с оплавленным концом берут по одной капле жидкости и заполняют ими раздельно обе сетки камеры, для чего каплю помещают перед щелью, образующейся между шлифованным стеклом и счетной камерой, в результате чего жидкость заполняет пространство над сетками.

Подсчёт эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере Горяева

Количество эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева подсчитывают с помощью микроскопа. Для этого заполненную разведенной кровью камеру Горяева помещают на предметный столик микроскопа и под малым увеличением (окуляр 15 X или 10Х, объектив 8Х), с опущенным конденсором находят сетку камеры. К подсчету форменных элементов приступают через 2-3 минуты после заполнения камеры кровью.

Эритроциты подсчитывают в пяти квадратах, каждый из которых разделен на 16 маленьких квадратиков. Подсчет начинают с левого верхнего квадрата, а затем продвигают камеру по диагонали сверху вниз.

Во избежание повторного подсчета одних и тех же эритроцитов руководствуются следующим правилом: все эритроциты внутри квадратика и на разграничительных линиях подсчитывают только тогда, когда они большей своей половиной заходят внутрь квадратика; клетки, пересеченные разграничительной чертой пополам, подсчитывают лишь на двух сторонах из четырех сторон квадрата (на левой и верхней); клетки, выходящие большей своей половиной за пределы разграничительных линий, совсем не считают.
Результаты подсчета эритроцитов по каждому из пяти больших квадратов записывают и суммируют. Для расчета количества эритроцитов пользуются следующей формулой:

где х — количество эритроцитов в 1 мм3 крови; а — сумма эритроцитов, подсчитанных в пяти квадратах; б — разведение крови в 200 раз; в — количество сосчитанных маленьких квадратиков — 80.

Для упрощения расчета к количеству подсчитанных эритроцитов приписывают четыре нуля.В норме количество эритроцитов от 4 500 000 до 5 000 000 в 1 мм3 крови. Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах.

При подсчете их руководствуются теми же правилами, которые указаны для эритроцитов, а затем производят расчет по приведенной выше формуле, в которой цифра разведения равна 20, а количество подсчитанных квадратов — 1600.

Для простоты расчета количество подсчитанных лейкоцитов умножают на 50 или делят на 2 и приписывают два пуля.

В норме количество лейкоцитов от 5000 до 8000 в 1 мм3 крови.

Источник: http://ginekolog.my1.ru/publ/klinicheskie_issledovanija/blood/podschet_ehritrocitov_i_lejkocitov_v_schetnoj_kamere/39-1-0-756

Подсчет эритроцитов в камере Горяева — каким образом происходит вычисление уровня эритроцитов?

Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере

Состав крови образован плазмой и форменными компонентами, большую часть из которых составляют эритроциты. Зрелые кровяные клетки не содержат ядра и имеют двояковогнутую форму.

их функция – транспортировка газов в тканях органов.

Уровень эритроцитарных клеток в крови человека зависим от таких факторов, как пол и возраст, но является величиной достаточно постоянной, поэтому колебание их количества дает ценную информацию в процессе диагностирования.

Для вычисления количества кровяных клеток чаще всего используется унифицированный метод подсчета эритроцитов с использованием оборудования, известного, как камера Горяева, либо с помощью электронных счетчиков автоматического типа. Оба способа на данный момент широко используются и в ежедневной лабораторной практике, и при научных изысканиях, так как погрешность результатов, полученных в ходе их применения, минимальна.

Строение камеры Горяева

Оптическое устройство – камера Горяева позволяет вычислить количество кровяных клеток в определенном объёме специальной жидкости. Идея создания устройства принадлежит русскому профессору Горяеву Н. К.

Главный элемент устройства – прозрачное предметное стекло с камерой, образованной углублением в форме прямоугольника, поверхность которой покрыта специальной микроскопической сеткой, и тонкое покровное стекло. Высокая точность результатов подсчета достигается благодаря повышенному объёму сетки в сравнении с аналогичными устройствами других типов.

Сетка устройства имеет площадь 9 мм2, размер одной стороны составляет 3 мм. Поверхность данного элемента образована квадратами общим числом в 225 шт. Из них одна сотня квадратов поделена на прямоугольники, еще столько же – не разграфлено, а 25 штук поделены на 16 более маленьких. Площадь 1 малого квадрата составляет 1/400 мм2, область над ним имеет объём 1/4000 мм3.

Разбавление крови с целью исследования

Определение количества эритроцитов состоит из нескольких последовательных действий. Первым этапом становится разведение определенного объёма крови в реагенте. Делается это в связи с огромным числом форменных элементов.

В качестве реагента чаще всего выступает раствор хлорида натрия концентрацией 0,9%. При необходимости альтернативой служит 5% раствор натрия цитрата. Процедуру разбавления крови выполняют в пробирке или в специальном смесителе, называемом меланжером.

Внимание! Использование растворов с более высокой или низкой концентрацией исключено, так как повлечет за собой разрушение кровяных клеток.

Разбавление крови в меланжере

Меланжером называется изготовленный из стекла градуированный капилляр длинной 10 см с расширением на конце, внутри которого расположен шарик. Последний выполняет важную функцию – равномерное смешивание раствора и крови. Цвет шарика меланжерного капилляра будет красным, если он предназначен для эритроцитов, и белым – для работы с лейкоцитами.

Методика подсчета эритроцитов позволяет проводить процедуру исследования и со стабилизированной кровью, и с нестабилизированным материалом сразу после его забора у пациента.

Кровь набирают меланжерным капилляром до деления 0,5, после чего кончик смесителя очищают от крови с помощью марли либо ватки и следующим действием набирают разбавляющий раствор до деления 101.

Перекрыв пальцами отверстия капилляра, полученный образец тщательно смешивают около 3 минут. В счётную камеру помещают четвёртую каплю, предварительно удалив первые три на марлю.

Таким образом получают разбавление крови в 200 раз.

Разбавление крови в пробирке

При пробирочном методе разбавления крови исследуемый материал разводят в 200 раз следующим образом: 4 мл раствора хлорида натрия помещают в пробирку, после чего добавляют 0,02 мл крови.

Для этого забор материала производят пипеткой, кончик которой протирают ваткой или другой тканью. Образец крови помещают на дно пробирки, пипетку промывают ближе к поверхности раствором хлорида натрия. Готовый образец перемешивают и оставляют до дальнейшего этапа исследования, но менее чем на 3 часа.

Подсчет количества эритроцитов

Камера Горяева обязательно располагается горизонтально. Всю площадь сетки аккуратно заполняют разведенным образцом. Важно проследить, чтобы не образовались пузырьки воздуха, ведь их наличие значительно исказит результат. В таком положении камера остается в течение одной минуты с целью оседания кровяных клеток.

Унифицированный метод подсчета эритроцитов проходит при среднем увеличении посредством микроскопического осмотра. Подсчет числа эритроцитов в камере Горяева ведут в 5 больших квадратах, поделенных на 16 малых.

Начало отсчета рекомендовано производить с большого квадрата, находящегося вверху слева, и далее по диагонали.

Важно! Чтобы количество клеток, находящихся на линиях малых квадратов, не было подсчитано дважды, рекомендуют пользоваться правилом Егорова: в каждом квадрате вести подсчет по двум определенным линиям (верхней и левой).

Начинают высчитывание клеток в малых квадратах в верхнем ряду слева направо от 1-го до 4-го в этом ряду. Переходя к следующему ряду, подсчет ведут в обратном порядке – справа налево. Переход к подсчету клеток в следующем большом квадрате производят после вычисления эритроцитов в этих 16 малых квадратах.

Непосредственно расчет числа эритроцитов ведут по формуле, отображенной на рисунке №2.

Обозначения в данной формуле расшифровываются следующим образом:

  • X – искомое число красных кровяных клеток в 1 мкл крови,
  • A обозначает количество сосчитанных клеток,
  • 200 – разбавление крови,
  • 80 – это количество малых посчитанных квадратов,
  • 1/4000 – объем маленького квадрата.

Внимание! Для достоверности результата расчет кровяных клеток при некоторых видах анемии необходимо проводить непосредственно после забора материала.

Возможные причины искажения результата

Как и любой другой лабораторный анализ, подсчет эритроцитов требует тщательной подготовки и аккуратности в исполнении. Искажение результатов анализа может возникнуть вследствие целого ряда причин. Оборудование хранят в сухом месте. Любая лабораторная работа, связанная с кровью, выполняется в резиновых перчатках.

Для начала следует убедиться в правильности подготовки и использования камеры. Перед работой и по ее окончании устройство необходимо тщательно промывать дистиллированной водой и насухо протирать мягкой тканью. Покровное стекло должно быть подготовлено заблаговременно таким же образом.

Возможные причины, влияющие на достоверность результата:

  • Некачественные реактивы, способные вызывать гемолиз.
  • Формирование сгустка крови в материале.
  • Неаккуратность в процессе забора крови в капилляр.
  • Плохо обработанные пробирки и пипетки.
  • Недобросовестная техника исполнения при работе с камерой и подсчете эритроцитов.
  • Высчитывание клеток сразу же после заполнения камеры (необходимо выждать 1 минуту, чтобы они успели осесть на поверхность).

В последнее время все большую популярность получает метод подсчета эритроцитов с использованием электронных счетчиков автоматического типа. Такая тенденция вполне обоснованна, так как автоматизированный процесс исследования значительно точнее и менее трудоёмок.

Принцип действия данного оборудования основан на разном показателе электропроводности клеток крови и раствора, в котором они помещены. Специальное электромагнитное устройство регистрирует изменение уровня сопротивления электрической цепи, когда эритроциты движутся через отверстие капилляра. Уже через несколько секунд на цифровом табло высвечивается результат с высчитанным числом клеток.

Повышенный показатель красных кровяных клеток в анализе называется полицитемией. Данное состояние возникает вследствие патологий, характеризующихся потерей жидкости в организме, например при диарейном синдроме.

Часто такое явление наблюдается на первых этапах инфекционных заболеваний, при отравлении токсичными веществами и прочем. Снижение же концентрации эритроцитов в крови известно как олигоцитемия.

И зачастую такая патология проявляется во время различного вида анемии.

Загрузка…

Источник: https://dlja-pohudenija.ru/serdcze/metod-podscheta-kolichestva-eritroczitov-v-krovi-s-pomoshhyu-kamery-goryaeva

Подсчет лейкоцитов и эритроцитов в камере Горяева (методика)

Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере

Камера Горяева

Камера Горяева представляет из себя простое устройство для визуального подсчета форменных элементов крови под микроскопическим увеличением. Оно сконструировано на основе предметного стекла, имеющего специальные углубления для номинального объема крови, а также покровного стекла с нанесенной сеткой.

Различают несколько конструкций камеры Горяева в зависимости от количества камер (углублений для заполнения кровью), чаще всего в лабораториях применяются двухкамерные или четырехкамерные модели. Над каждой из камер находится специальная счетная сетка, нанесенная на покровное стекло методом лазерной гравировки либо при помощи микронапыления краски.

Приспособление сконструировано таким образом, что все имеющиеся камеры имеют равный объем, который указан в технической документации модели, их глубина и размеры секторов покровной сетки также стандартны. Это делает возможным переводить после подсчета форменных элементов их суммарные значения в единицы концентрации заданных клеток в объеме крови.

Описание сетки камеры Горяева

Сетка в камере Горяева

Покровное стекло имеет гравировку в виде сетки, большие квадраты которой имеют величину стороны в 1 мм. Чаще всего таких квадратов 9 над каждой счетной камерой, они расположены так, что образуют три столбца по три квадрата в каждом.

Те большие квадраты, что располагаются по периферии, разделены на 16 квадратов поменьше, длина и ширина которых равны 0,2 мм.

Стандартная глубина камеры под этими квадратами позволяет легко подсчитывать количество клеток в единицах объема, он равен для них 0,1 мм3 или 10-4 мл.

Большой квадрат, расположенный посередине, имеет дополнительные разделяющие линии, они нанесены так, что делят каждый из 16 средних квадратов еще на 16 самых маленьких. Их сторона равна 0,05 мм.

Правило Егорова для подсчета форменных элементов

Правильный подсчет клеток в сетке

Подсчет форменных элементов крови ведется под микроскопом с применением соответствующего увеличения, чаще всего используется окуляр х10. Подсчитывают число клеток в тех больших квадратах, что разделены на 16 средних, начинают считать от верхнего левого и двигаются вниз направо, захватывая при подсчете 5 больших квадратов.

Для того, чтобы верно определить количество клеток в заданном объеме крови, необходимо исключить повторный подсчет тех форменных элементов, что располагаются на границах или узлах сетки.

Такая ошибка привела бы к увеличению подсчитываемого показателя, для ее устранения было сформулировано правило Егорова.

Оно гласит, что к данному квадрату относятся те элементы, что лежат в его пределах, не касаясь нанесенных линий, а также те клетки, что располагаются на верхней и левой сторонах квадрата. Те клетки, что «касаются» нижней или правой стороны, при подсчете учитываться не должны.

Методика подсчета лейкоцитов

При ошибке анализатора помогает камера Горяева

Для подсчета лейкоцитов в крови в современных клинических лабораториях чаще всего используются специальные автоматические анализаторы, методика подсчета при помощи камеры Горяева относится к редко применяемым из-за своей трудоемкости и низкой скорости анализа. Для того, чтобы верно определить концентрацию отдельных видов лейкоцитов, требуется врач лабораторной диагностики или фельдшер-лаборант, владеющий навыками работы с микроскопом.

Подсчет при помощи камеры Горяева оправдан в тех случаях, когда автоматический анализатор не способен верно идентифицировать клетки крови пациента.

Это случается при онкологических заболеваниях системы крови и некоторых других болезнях, при которых клетки имеют нетипичный вид и объем.

К плюсам визуального подсчета относится возможность углубленной диагностики благодаря тому, что опытный врач способен отличить измененные клетки, характерные для отдельных патологий, и отразить их наличие в результатах анализа.

Лейкоциты должны быть подготовленными перед работой

Для подсчета отдельных видов лейкоцитов кровь разводят в несколько раз слабым раствором уксусной кислоты, при этом образцы без лейкоцитоза, как правило, следует разводить не менее чем в 20 раз, в случаях выраженного увеличения количества белых кровяных телец может потребоваться большее разведение. Для контрастирования изображения применяют окрашивание метиленовой синью.

После заполнения камер исследуемым объемом крови сверху накладывается покровное стекло сеткой и производится ее притирка, в ходе которой должны полностью исчезнуть пузыри воздуха между двумя стеклами. Заполненная камера помещается под микроскоп, причем целесообразно оставить ее неподвижной на 1-2 минуты для того, чтобы форменные элементы полностью прекратили движение и осели.

После этого на среднем увеличении (окуляр не менее чем х10) проводится подсчет отдельных видов лейкоцитов в не менее чем 100 квадратах.

Для перевода получившегося числа в объемные значения необходимо умножить его на разведение (как правило, в 20 раз) и на количество квадратов, участвовавших в подсчете (чаще всего 100).

Полученное число дает представление о количестве лейкоцитов в 1 мкл крови.

Методика подсчета эритроцитов

Соблюдение алгоритма позволяет произвести точный подсчет клеток

Исследуемую кровь разводят при помощи физиологического раствора минимум в 100 раз для того, чтобы стал возможен визуальный подсчет красных кровяных телец. При недостаточном разведении в камерах образуется двойной слой форменных элементов крови, что делает невозможным их определение.

После наложения покровного стекла и притирки проводят микроскопирование препарата при увеличении окуляром х10. Подсчет ведется во всех 5 больших квадратах, разделенных линиями на 16 секторов.

Расчет объемных значений проводят при помощи умножения полученного числа эритроцитов на степень разведения (чаще в 100 или 200 раз) и на 4000, затем проводят деление полученного числа на 80 (количество малых квадратов при подсчете). Полученное число характеризует количество эритроцитов в 1 мкл крови.

Источник: https://gidanaliz.ru/poznavatelno/podschet-v-kamere-gorjaeva.html

Наше здоровья
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: